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Introduction à la technologie d'extraction des acides nucléiques

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L'acide nucléique est divisé en acide désoxyribonucléique (ADN) et acide ribonucléique (ARN), parmi lesquels l'ARN est divisé en ARN ribosomal (ARNr), ARN messager (ARNm) et ARN de transfert (ARNt) selon ses différentes fonctions.L'ADN est principalement concentré dans le noyau, les mitochondries et le chloroforme, tandis que l'ARN est principalement distribué dans le cytoplasme.En tant que base matérielle de l'expression des gènes, l'extraction d'acide nucléique joue un rôle extrêmement important dans la recherche en biologie moléculaire et dans le diagnostic moléculaire clinique.La concentration et la pureté de l'extraction de l'acide nucléique affecteront directement la PCR, le séquençage, la construction de vecteurs, la digestion enzymatique et d'autres expériences ultérieures.

 Procédé d'extraction et de purification d'acide nucléique 

① Méthode d'extraction au phénol/chloroforme

L'extraction au phénol/chloroforme est une méthode classique d'extraction de l'ADN, qui utilise principalement deux solvants organiques différents pour traiter les échantillons, en dissolvant l'acide nucléique à base d'ADN dans la phase aqueuse, les lipides dans la phase organique et les protéines entre les deux phases.Cette méthode présente les avantages d’un faible coût, d’une grande pureté et d’un bon effet.Les inconvénients sont une opération compliquée et longue.

② Méthode Trizol

La méthode Trizol est une méthode classique d’extraction d’ARN.La méthode Trizol est divisée en phase aqueuse et phase organique après centrifugation avec du chloroforme, dans laquelle l'ARN est dissous dans la phase aqueuse, la phase aqueuse est transférée dans un nouveau tube EP, une précipitation est obtenue après ajout d'isopropanol, puis purification à l'éthanol.Cette méthode convient à l’extraction d’ARN de tissus animaux, de cellules et de bactéries.

③ Méthode de purification sur colonne centrifuge

La méthode de purification sur colonne de centrifugeuse peut adsorber l'ADN spécifiquement à travers des matériaux spéciaux d'adsorption à matrice de silicium, tandis que l'ARN et les protéines peuvent passer en douceur, puis utiliser un pH élevé en sel et faible pour combiner l'acide nucléique, une élution à faible teneur en sel et à pH élevé pour séparer et purifier l'acide nucléique.Les avantages sont une concentration de purification élevée, une stabilité élevée, l’absence de solvant organique et un faible coût.L'inconvénient est qu'il doit être centrifugé étape par étape, soit plusieurs étapes opérationnelles.

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④ Méthode des perles magnétiques

La méthode des billes magnétiques consiste à diviser l'échantillon de tissu cellulaire à travers le lysat, à libérer l'acide nucléique dans l'échantillon, puis les molécules d'acide nucléique sont spécifiquement adsorbées à la surface de la bille magnétique, tandis que les impuretés telles que les protéines et les sucres sont laissées dedans. le liquide.Grâce aux étapes de division du tissu cellulaire, de liaison des billes magnétiques avec l'acide nucléique, de lavage de l'acide nucléique, d'élution de l'acide nucléique, etc., l'acide nucléique pur est finalement obtenu.Les avantages sont un fonctionnement simple et une utilisation rapide, sans nécessité de centrifugation par étapes.Il a de faibles exigences techniques et peut réaliser un fonctionnement automatique et de masse.La combinaison spécifique de billes magnétiques et d'acide nucléique confère à l'acide nucléique extrait une concentration et une pureté élevées.L’inconvénient est que le prix actuel du marché est relativement élevé.

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⑤ Autres méthodes

En plus des quatre méthodes ci-dessus, il existe le craquage par ébullition, la méthode au sel concentré, la méthode au détergent anionique, la méthode par ultrasons et la méthode enzymatique, etc.

 Type d'extraction d'acide nucléique

Foregene possède la première plateforme de PCR directe au monde, une plateforme d'isolement d'ARN à double colonne (ADN uniquement + ARN uniquement).Les principaux produits comprennent des kits d'isolement d'ADN/ARN, des séries de réactifs de laboratoire moléculaire de réactifs PCR et PCR directs.

① Extraction totale d'ARN

Les échantillons d'extraction d'ARN total comprennent le sang, les cellules, les tissus animaux, les plantes, les virus, etc. Une pureté élevée et une concentration élevée d'ARN total peuvent être obtenues grâce à l'extraction d'ARN total, qui peut être utilisée en RT-PCR, analyse sur puce, traduction in vitro, clonage moléculaire, Dot Blot et autres expériences.

Lié à l'origineKits d'isolement d'ARN

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Kit d'isolement d'ARN total animal--Extrayez rapidement et efficacement l’ARN total de haute pureté et de haute qualité de divers tissus animaux.

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Kit d'isolement d'ARN total cellulaire--Un ARN total hautement purifié et de haute qualité peut être obtenu à partir de diverses cellules cultivées en 11 minutes.

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Kit d’isolement d’ARN total végétal--Extrayez rapidement l’ARN total de haute qualité à partir d’échantillons de plantes à faible teneur en polysaccharides et polyphénols.

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Kit d'isolement d'ARN viral--Isolez et purifiez rapidement l'ARN viral à partir d'échantillons tels que le plasma, le sérum, les fluides corporels acellulaires et les surnageants de culture cellulaire.

② Extraction d'ADN génomique

Les échantillons d'extraction d'ADN génomique comprennent le sol, les matières fécales, le sang, les cellules, les tissus animaux, les plantes, les virus, etc. L'extraction d'ADN génomique peut être utilisée dans la digestion enzymatique, la construction de bibliothèques d'ADN, la PCR, la préparation d'anticorps, l'analyse d'hybridation par Western blot, la puce génétique, la haute -séquençage de débit et autres expériences.

Lié à l'origineKits d'isolement d'ADN

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Kit d'isolement d'ADN de tissus animaux--Extraction et purification rapides de l'ADN génomique à partir de sources multiples, telles que les tissus animaux, les cellules, etc.

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Kit Midi ADN sanguin (1-5 ml)--Purifiez rapidement l'ADN génomique de haute qualité du sang anticoagulé (1 à 5 ml).

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Kit d'isolement d'ADN d'écouvillon buccal/carte FTA--Purifiez rapidement l'ADN génomique de haute qualité à partir d'échantillons d'écouvillons buccaux/de cartes FTA.

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Kit d'isolement d'ADN végétal--Purifiez et obtenez rapidement de l'ADN génomique de haute qualité à partir d'échantillons de plantes (y compris des échantillons de plantes de polysaccharides et de polyphénols)

③ Extraction du plasmide

Le plasmide est une sorte de petite molécule circulaire d'ADN dans les cellules, qui est un support commun pour la recombinaison de l'ADN.La méthode d'extraction du plasmide consiste à éliminer l'ARN, à séparer le plasmide de l'ADN génomique bactérien et à éliminer les protéines et autres impuretés pour obtenir un plasmide relativement pur.

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Mini kit plasmidique général--Purifiez rapidement l'ADN plasmidique de haute qualité provenant de bactéries transformées pour des expériences de biologie moléculaire de routine telles que la transformation et la digestion enzymatique

④ Autres types d'extraction, extraction de miARN, etc.

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Kit d'isolement de miARN animaux- Extraire rapidement et efficacement de petits fragments d'ARN de 20 à 200 nt de miARN, siARN et snARN de divers tissus et cellules animaux.

 Exigences relatives au résultat de l'extraction et de la purification des acides nucléiquess

① Pour assurer l'intégrité de la structure primaire de l'acide nucléique.

② Réduire l'interférence des protéines, sucres, lipides et autres macromolécules

③ Il ne doit y avoir aucun solvant organique ni concentration élevée d'ions métalliques susceptibles d'inhiber l'enzyme dans les échantillons d'acide nucléique.

④ L'ARN et autres contaminations par les acides nucléiques doivent être éliminés lors de l'extraction de l'ADN, et vice versa.

 


Heure de publication : 24 novembre 2022
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